高效液相色谱仪的原理

  1.高压：液相色谱法以液体为活动相（称为载液），液体流经色谱柱，遭到阻力较大，为了迅速地经过色谱柱，有必要对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。

  2.高速：活动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的剖析时刻较之经典液相色谱法少得多，一般少于1h 。

  4.高活络度：高效液相色谱已广泛选用高活络度的检测器，进一步提升了剖析的活络度。如荧光检测器活络度可达10-11g。别的，用样量小，一般几个微升。

  5.习惯规模宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有别离才能好，活络度较高，剖析速度快，操作快捷等长处，但是受技能条件的约束，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于使用气相色谱法做多元化的剖析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因而不受试样挥发性的约束。关于高沸点、耐热性差、相对分子量大（大于400 以上）的有机物（这些物质简直占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可使用高效液相色谱法来进行别离、剖析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱剖析的约占20%，而能用液相色谱剖析的约占70～80%。

  高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交流液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚集液相色谱等类型。用不相同的高效液相色谱别离或剖析各种化合物的原理基本上与相对应的一般液相层析的原理类似。其不同之处是高效液相色谱活络、快速、分辨率比较高、重复性好，且须在色谱仪中进行。

  1 ．液 — 液分配色谱法（Liquid-liquid PartitionChromatography）及化学键合相色谱（Chemically Bonded PhaseChromatography）活动相和固定相都是液体。活动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，防止固定液丢失），有一个显着的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。到达平衡时，服从于下式：式中，cs—溶质在固定相中浓度；cm--溶质在活动相中的浓度；Vs—固定相的体积；Vm—活动相的体积。LLPC与GPC有类似之处，即别离的次序取决于K，K大的组分保存值大；但也有不同之处，GPC中，活动相对K影响不大，LLPC活动相对K影响较大。

  c. 液 —液分配色谱法的缺陷：虽然活动相与固定相的极性要求彻底不同，但固定液在活动相中仍有微量溶解；活动相经过色谱柱时的机械冲击力，会构成固定液丢失。上世纪70年代末开展的化学键合固定相（见后），可战胜上述缺陷。现在使用很广泛（70~80%）。

  活动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附效果的不同来进行别离的。其效果机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子（X） 和溶剂分子（S）对吸附剂外表活性中心产生竞赛吸附（未进样时，一切的吸附剂活性中心吸附的是S），可表明如下：Xm + nSa ====== Xa + nSm

  式中：Xm--活动相中的溶质分子；Sa--固定相中的溶剂分子；Xa--固定相中的溶质分子；Sm--活动相中的溶剂分子。

  当吸附竞赛反响达平衡时：K=［Xa］［Sm］/［Xm］［Sa］式中：K为吸附平衡常数。

  IEC是以离子交流剂作为固定相。IEC是根据离子交流树脂上可电离的离子与活动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交流，根据这些离子以交流剂具有不相同的亲和力而将它们别离。

  离子对色谱法是将一种 （ 或多种 ）与溶质分子电荷相反的离子 （ 称为对离子或反离子 ）加到活动相或固定相中，使其与溶质离子结合构成疏水型离子对化合物，然后操控溶质离子的保存行为。其原理可用下式表明：X+水相 + Y-水相 === X+Y-有机相

  式中：X+水相--活动相中待别离的有机离子（也但是阳离子）；Y-水相--活动相中带相反电荷的离子对（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）；X+Y---构成的离子对化合物。