【仪器设施笔记】高效液相色谱HPLC-定义、原理、部件、类型、用途、图表

  什么是高效液相色谱 (HPLC)？高效液相色谱（HPLC）原理高效液相色谱 (HPLC) 仪器高效液相色谱 (HPLC) 的类型高效液相色谱 (HPLC) 的应用高效液相色谱 (HPLC) 的优势局限性参考

  高效液相色谱或通常称为 HPLC，是一种用于分离、识别或量化混合物中每种成分的分析技术。使用柱色谱的基础原理分离混合物，然后通过光谱进行检验确定和定量。在 1960 年代，柱色谱 LC 及其低压合适的玻璃柱逐步发展为 HPLC 及其高压合适的金属柱。因此，HPLC 绝大多数都是柱液相色谱的高度改进形式。溶剂不是在重力作用下滴落通过色谱柱，而是在高达 400 个大气压的高压下被迫通过。

  纯化发生在固定相和流动相之间的分离柱中。固定相是分离柱中有很小的多孔颗粒的颗粒材料。另一方面，流动相是在高压下被迫通过分离柱的溶剂或溶剂混合物。通过连接有样品环路的阀门，即不锈钢制成的小管或毛细管，使用注射器将样品注入从泵到分离柱的流动相流中。随后，样品的各个成分以不同的速率迁移通过色谱柱，因为它们通过与固定相的相互作用在不同程度上被保留。离开色谱柱后，单个物质会被合适的检测器检测到，并作为信号传递给计算机上的 HPLC 软件。在此操作/运行结束时，获得计算机上 HPLC 软件中的色谱图。色谱图允许对不同物质进行检验确定和量化。

  图片来源：LaboratoryInfo泵HPLC 的发展带动了泵系统的发展。泵位于液相色谱系统的最上游，并产生从溶剂储罐进入系统的洗脱液流。产生高压是泵的“标准”要求，除此之外，它还应该能够在任何条件下提供一致的压力以及可控和可重复的流量。当前 LC 系统中使用的大多数泵通过电机驱动活塞（往复泵）的来回运动产生流量。由于这种活塞运动，它会产生“脉冲”。注射器注射器放置在泵旁边。最简单的方法是使用注射器，将样品引入洗脱液流中。最普遍的使用的注入方法是基于采样环。自动进样器（自动进样器）系统的使用也被广泛使用，允许在设定的预定时间重复进样。柱子分离在柱内进行。最近的色谱柱通常是在不锈钢外壳中制备的，而不是玻璃柱。与碳酸钙相比，通常使用的填料是二氧化硅或聚合物凝胶。用于 LC 的洗脱液从酸性到碱性溶剂不等。大多数色谱柱外壳由不锈钢制成，因为不锈钢可耐受多种溶剂。探测器分析物的分离在柱内进行，而检测器用于观察获得的分离。当不存在分析物时，洗脱液的组成是一致的。而分析物的存在会改变洗脱液的组成。检测器所做的就是测量这些差异。这种差异以电子信号的形式进行监测。有不一样的检测器可用。记录器检测器检测到的洗脱液变化是以电子信号的形式存在的，因此我们的眼睛仍然看不到。在过去，广泛使用笔（纸）图表记录器。如今，基于计算机的数据处理器（集成器）更为普遍。有多种类型的数据处理器；来自一个由内置打印机和文字处理器组成的简单系统，而那些带有专为 LC 系统模块设计的软件的软件不但可以采集数据，还具有峰拟合、基线校正、自动浓度计算、分子量测定等功能.脱气机用于 LC 分析的洗脱液可能含有我们肉眼看不见的气体，例如氧气。当洗脱液中存在气体时，这会被检测为噪音并导致基线不稳定。脱气器使用特殊的聚合物膜管去除气体。聚合物管表面上的许多非常小的孔允许空气通过，同时防止任何液体通过孔。柱温箱LC 分离通常在很大程度上受柱温的影响。为了获得可重复的结果，保持一致的温度条件很重要。同样对某些分析，例如糖和有机酸，在高温（50 至 80°C）下能够得到更好的分辨率。因此，色谱柱通常保存在柱温箱（柱温箱）内。

  常规：柱填料是极性的（例如硅胶），流动相是非极性的。它用于水敏化合物、几何异构体、顺反异构体和手性化合物。反相：柱填料是非极性的（例如C18），流动相是水+可混溶的溶剂（例如甲醇）。它可用于极性、非极性、可电离和离子样品。离子交换：柱填料含有离子基团，流动相为缓冲液。它用于分离阴离子和阳离子。分子筛：分子扩散到多孔介质的孔中，并根据它们与孔径的相对大小进行分离。大分子先洗脱，小分子后洗脱。

  HPLC 已发展成为一种普遍适用的方法，因此它几乎可用于化学、生物化学和制药的所有领域。药物分析合成聚合物的分析环境分析中的污染物分析生物基质中药物的测定隔离有价值的产品工业产品和精细化学品的产品纯度和质量控制酶或核酸等生物高分子的分离纯化净水微量成分的预浓缩配体交换层析蛋白质的离子交换层析碳水化合物和低聚糖的高 pH 阴离子交换层析

  成本：尽管具有优势，但 HPLC 可能成本很高，需要大量昂贵的有机物。复杂HPLC对某些化合物的灵敏度确实较低，有些化合物由于不可逆吸附而无法检测。挥发性物质用气相色谱分离效果更好。